«Прогресс основанных на стволовой клетке способов лечения был ограничен отечественной возможностью подтвердить подлинность тканей и клеток», сообщил Капиль Барти, врач философии, Следователь Стэдтмена в Единице на Глазном и Стволовой клетке Переводное Изучение в National Eye Institute (NEI), части NIH. «Это опробование расширяет ту свойство и оптимизировало процесс».Опробование было обрисовано в недавней проблеме Стволовых клеток Переводная Медицина.RPE – единственный слой клеток, что находится смежный с сетчаткой, где светочувствительные фоторецепторы в большинстве случаев именуемые конусы и пруты расположены.
RPE поддерживает функцию фоторецептора. Пара заболеваний заставляют RPE ломаться, что со своей стороны ведет к видения и потеря фоторецепторов.Стволовые клетки, каковые врач Барти применяет, дабы сделать RPE, позваны плюрипотентные (IPS) стволовые клетки, каковые произведены возвращающимися зрелыми клетками для незрелого страны, сродни эмбриональным стволовым клеткам. клетки IPS смогут быть взяты из кожи больного либо клеток крови, уговоренных в другие типы клетки (такие как нейроны либо мышца), и в теории, повторно внедренной, не приводя к свободному отклонению.
Дабы проверить идентичность RPE, сделанного из клеток IPS, ученые применяют микроскопию, дабы обеспечивать, что ткань похожа на RPE и физиологическое опробование, дабы обеспечивать, что ткань ведет себя как RPE. Они кроме этого применяют технику, названную количественным RT-PCR, дабы измерить экспрессию генов, каковые показывают на длящееся функцию и развитие клетки. К примеру, выражение гена SOX2 намного выше в клетках IPS, чем зрелый RPE.
Но количественный RT-PCR лишь разрешает одновременное измерение нескольких генов за пример. Врач Барти объединился с Марком Феррером, врачом философии, Национального Центра NIH Продвижения Переводных Наук (NCATS), дабы развивать мультиплексное опробование – способ чтобы в один момент измерить многократные гены за пример RPE высоко автоматизированным методом. Опробование основано на коммерчески дешёвой платформе от компании биотехнологии Affymetrix.
В опробовании маленькие отрывки ДНК, ограниченной бусинками, употребляются, дабы захватить молекулы РНК – создал, в то время, когда гены выражены клетками в примере RPE. По окончании того, как захваченный, РНК от хороших генов маркирована флуоресцентным показателем.
Начиная с клеток от биопсии кожи, исследователи произвели ПОЛУЧЕННЫЙ ИЗ IPS RPE и после этого измерили выражение восьми генов, каковые являются маркерами развития, болезни и функции. Они измерили уровни РНК каждого гена, по одному применяя количественный RT-PCR и после этого все гены, в один момент применяя мультиплексное опробование. В то время, когда сравнено, результаты коррелируются.Исследователи тогда применяли мультиплексное опробование, дабы сравнить экспрессию гена ВЗЯТОГО ИЗ IPS RPE к клеткам IPS и к клеткам RPE, культивированным от глаза.
Если сравнивать с клетками светло синий ПОЛУЧЕННЫЙ ИЗ IPS RPE выразил более низкие уровни SOX2 и более большие уровни RPE-определенных генов PAX6, RPE65, RDH5, TRPM1 и BEST1. Если сравнивать с культурным RPE ПОЛУЧЕННЫЙ ИЗ IPS RPE выразил более большие уровни SOX2 и PAX6 – обоих маркеров развития – но более низкие уровни RPE-определенных генов, предложив довольно незрелое страну.
«Данный отчет демонстрирует подтверждение принципа, что соответствующие трансформации экспрессии гена в ВЗЯТОМ ИЗ IPS RPE смогут быть измерены с уверенностью, применяя всецело автоматизированное, опробование высокой пропускной свойстве», сообщил врач Барти. Когда у них была работа опробования, исследователи поделили на два ее цена и увеличили ее производство при помощи меньшего меньших объёмов и количества клеток раствора.Врач Барти и коллеги в NEI сотрудничают с нью-йоркским Фондом Стволовой клетки, дабы произвести клеточные линии IPS от больных с возрастной дегенерацией желтого пятна (AMD) – самый распространенной обстоятельством утраты видения среди американцев старшего возраста – и от вторых больных с редкими наследственными заболеваниями глаз. Эти клеточные линии IPS будут дешёвы всему научному сообществу через центральное хранилище.
Врач Барти произведет RPE от этих клеточных линий, дабы изучить AMD.Мультиплексное опробование будет употребляться в качестве проверки качества на клетках, и для показа эффектов возможно терапевтических комплексов.
Это кроме этого окажет помощь усовершенствовать производство RPE для терапии клетки. С Терапевтической Премией неприятности от Общего Фонда NIH врач Барти прилагает упрочнения к клиническому опробованию ВЗЯТОГО ИЗ IPS RPE для AMD.
Опробование проверит, повредила ли замена RPE с RPE от собственных камер больных, может не допустить СВЯЗАННУЮ С AMD утрату видения.